DNA合成仪的合成原理:
DNA的固相合成:即将DNA的3端固定在基材上,然后沿3到5方向依次加入核苷酸,直至合成所需的DNA片段。与使用 DNA 聚合酶合成 DNA 不同。
合成过程:
第一个碱基的3端固定在树脂上,下一个碱基的5-OH用二对甲氧基三苯甲基DMT保护,碱基上的氨基用苯甲酸保护,然后活化3-OH 与氨基磷酸酯化合物。
1.1 个碱基的 5-OH 和下一个碱基的 3-OH 形成亚磷酸三酯
2.然后与碘氧化形成磷酸三酯
3. 加入二lu乙酸去除第二个碱 5-OH 基团上的保护剂 DMT
合成完成后循环添加下一个碱基
1.用苯硫酚去除5-OH上的保护剂DMT
2. 用浓氢氧化铵将碎片与固体树脂断开并洗脱
3. 用浓氢氧化铵加热去除底座上的保护剂。
4. 除去氢氧化铵并真空干燥
5. 液相色谱或 PAGE,回收长片段。